Long term follow up of biomarkers of podocyte damage and renal function in patients with and without preeclampsia / Seguimento de longo prazo com biomarcadores de dano podocitário e função renal em pacientes com e sem pré-eclâmpsia

ABSTRACT Introduction: preeclampsia can be associated with future renal disease. Objectives: To measure changes in renal function overtime in patients with preeclampsia. Methods: urine and serum samples from eleven patients with preeclampsia and eight patients with a normal pregnancy were obtained during pregnancy, postpartum, and 3 years after delivery. Urine podocalyxin, protein, and serum creatinine were measured. Results: after 3 years, there were no significant differences in urinary podocalyxin in patients with or without preeclampsia: 4.34 ng/mg [2.69, 8.99] vs. 7.66 ng/mg [2.35, 13], p = 0.77. The same applied to urinary protein excretion: 81.5 mg/g [60.6, 105.5] vs. 43.2 mg/g [20.9, 139.3] p = 0.23. Serum creatinine was 0.86 mg/dL [0.7, 0.9] vs. 0.8 mg/dL [0.68, 1] p = 0.74 in those with and without preeclampsia. In normal patients, urinary podocalyxin decreased from 54.4 ng/mg [34.2, 76.9] during pregnancy to 7.66 ng/mg [2.35, 13] three years after pregnancy, p = 0.01. Proteinuria decreased from 123.5 mg/g [65.9, 194.8] to 43.2 mg/g [20.9, 139.3], p = 0.12. In preeclampsia patients, urinary podocalyxin decreased from 97.5 ng/mg [64.9, 318.4] during pregnancy to 37.1 ng/mg within one week post-partum [21.3, 100.4] p = 0.05 and 4.34 ng/mg [2.69, 8.99] three years after, p = 0.003. Proteinuria was 757.2 mg/g [268.4, 5031.7] during pregnancy vs. 757.2 mg/g [288.2, 2917] postpartum, p = 0.09 vs. 81.5 mg/g [60.6, 105.5] three years later, p = 0.01. Two patients still had proteinuria after 3 years. Conclusions: in preeclampsia patients, postpartum urinary podocalyxin decreased before proteinuria. After three years, serum creatinine, urinary podocalyxin, and protein tended to normalize, although some patients still had proteinuria.

RESUMO Introdução: a pré-eclâmpsia pode estar associada à doença renal no futuro. Objetivos: medir mudanças na função renal ao longo do tempo em pacientes com pré-eclâmpsia. Métodos: amostras de urina e soro de onze pacientes com pré-eclâmpsia e oito pacientes com gravidez normal foram obtidas durante a gravidez, pós-parto e 3 anos após o parto. Medimos podocalixina na urina, proteína e creatinina sérica. Resultados: após 3 anos, não houve diferenças significativas na podocalixina urinária em pacientes com ou sem pré-eclâmpsia: 4,34 ng/mg [2,69, 8,99] versus 7,66 ng/mg [2,35, 13], p = 0,77. O mesmo se aplicou à excreção urinária de proteínas: 81,5 mg/g [60,6, 105,5] vs. 43,2 mg/g [20,9, 139,3] p = 0,23. A creatinina sérica foi de 0,86 mg/dL [0,7, 0,9] vs. 0,8 mg/dL [0,68, 1] p = 0,74 naqueles com e sem pré-eclâmpsia. Em pacientes normais, a podocalixina urinária diminuiu de 54,4 ng/mg [34,2, 76,9] durante a gestação para 7,66 ng/mg [2,35, 13] três anos após a gravidez, p = 0,01. A proteinúria diminuiu de 123,5 mg/g [65,9, 194,8] para 43,2 mg/g [20,9, 139,3], p = 0,12. Em pacientes com pré-eclâmpsia, a podocalixina urinária diminuiu de 97,5 ng/mg [64,9, 318,4] durante a gravidez para 37,1 ng/mg em uma semana de pós-parto [21,3, 100,4] p = 0,05 e 4,34 ng/mg [2,69, 8,99] três anos depois, p = 0,003. A proteinúria foi de 757,2 mg/g [268.4, 5031.7] durante a gravidez vs. 757,2 mg/g [288.2, 2917] pós-parto, p = 0.09 vs. 81.5 mg/g [60.6, 105.5] três anos depois, p = 0.01. Dois pacientes ainda apresentavam proteinúria após 3 anos. Conclusões: em pacientes com pré-eclâmpsia, a podocalixina urinária pós-parto diminuiu antes da proteinúria. Após três anos, a creatinina sérica, a podocalixina urinária e a proteína tenderam a se normalizar, embora alguns pacientes ainda tivessem proteinúria.

Podocitúria na doença de Fabry / Podocyturia in Fabry disease

Resumo Introdução: A doença de Fabry (DF) é uma desordem lisossômica ligada ao cromossomo X ocasionada por mutações no gene que codifica a enzima lisossômica α-galactosidase A (α-GAL). A redução ou ausência da atividade dessa enzima leva ao acúmulo progressivo de gb3. A doença renal é uma importante consequência clínica da acumulação de Gb3. Podócito é o tipo celular mais afetado na doença renal, que mostra apenas uma resposta parcial à Terapia de Reposição Enzimática. Além disso, a disfunção podocitária é a principal contribuinte para a perda progressiva da função renal e pode ser encontrada alterada mesmo antes do início da microalbuminúria. Assim, a podocitúria na DF pode ser uma ferramenta importante para prever a doença renal. Objetivo: O objetivo deste estudo foi quantificar a excreção urinária de podócitos em pacientes com DF (V269M, n = 14) e controles saudáveis (n = 40), e relacioná-las com as variáveis sexo, idade, tempo de terapia e a razão albumina: creatinina (AUC). Métodos: Podócitos urinários foram identificados utilizando imunofluorescência para podocalixina e DAPI. O número de células podocalixina positivo foi contado e o número médio foi utilizado (faixa normal 0-0.6 podócitos/mL). Resultados: O número médio de podócitos na urina de pacientes com DF foi significativamente maior do que os controles saudáveis (p < 0.0001). Observou-se uma correlação positiva entre podocitúria e AUC (p = 0.004; r2 = 0.6417). Conclusão: A podocitúria pode ser uma ferramenta adicional para avaliar a progressão da doença renal em pacientes que se espera que tenha um fenótipo mais agressivo.

Abstract Introduction: Fabry disease is a lysosomal storage disorder due to abnormalities in the GLA gene (Xq22). Such changes result in the reduction/absence of activity of the lysosome enzyme α-GAL, whose function is to metabolize globotriaosylceramide (Gb3). Renal disease is a major clinical outcome of the accumulation of Gb3. Podocyte injury is thought to be a major contributor to the progressive loss of the renal function and may be found altered even before the onset of microalbuminuria. Objective: The aim of this study was to quantify the urinary excretion of podocytes in Fabry disease patients (V269M, n = 14) and healthy controls (n = 40), and to correlate podocyturia with the variables gender, age, time of therapy and albumin: creatinine ratio (ACR). Methods: Urinary podocytes were stained using immunofluorescence to podocalyxin and DAPi. The number of podocalyxin-positive cells was quantified and the average number was taken (normal range 0-0.6 podocytes/mL). Results: The average number of podocytes in the urine of Fabry disease patients was significantly higher than in healthy controls (p < 0.0001). We observed a positive correlation between podocyturia and ACR (p = 0.004; (r2 = 0.6417). We found no correlation between podocyturia and gender, age or duration of therapy. Conclusion: Podocyturia is an important parameter in the assessment of renal disease in general, and it may serve as an additional early tool for monitoring Fabry disease nephropathy even before changes in ACR are seen. This may prove to be a useful tool to assess disease progression in patients expected to have a more aggressive phenotype.

High prevalence of methicillin resistance and PVL genes among Staphylococcus aureus isolates from the nares and skin lesions of pediatric patients with atopic dermatitis

Staphylococcus aureus is highly prevalent among patients with atopic dermatitis (AD), and this pathogen may trigger and aggravate AD lesions. The aim of this study was to determine the prevalence of S. aureus in the nares of pediatric subjects and verify the phenotypic and molecular characteristics of the isolates in pediatric patients with AD. Isolates were tested for antimicrobial susceptibility, SCCmec typing, and Panton-Valentine Leukocidin (PVL) genes. Lineages were determined by pulsed-field gel electrophoresis and multilocus sequence typing (MLST). AD severity was assessed with the Scoring Atopic Dermatitis (SCORAD) index. Among 106 patients, 90 (85%) presented S. aureus isolates in their nares, and 8 also presented the pathogen in their skin infections. Two patients had two positive lesions, making a total of 10 S. aureus isolates from skin infections. Methicillin-resistant S. aureus (MRSA) was detected in 24 (26.6%) patients, and PVL genes were identified in 21 (23.3%), including 6 (75%) of the 8 patients with skin lesions but mainly in patients with severe and moderate SCORAD values (P=0.0095). All 24 MRSA isolates were susceptible to trimethoprim/sulfamethoxazole, while 8 isolates had a minimum inhibitory concentration (MIC) to mupirocin >1024 μg/mL. High lineage diversity was found among the isolates including USA1100/ST30, USA400/ST1, USA800/ST5, ST83, ST188, ST718, ST1635, and ST2791. There was a high prevalence of MRSA and PVL genes among the isolates recovered in this study. PVL genes were found mostly among patients with severe and moderate SCORAD values. These findings can help clinicians improve the therapies and strategies for the management of pediatric patients with AD.

Hydrochloride pioglitazone protects diabetic rats against podocyte injury through preserving glomerular podocalyxin expression / O cloridrato de pioglitazona protege ratos diabéticos contra a injúria aos podócitos por meio da preservação da expressão de podocalixina glomerular

Objective: We sought to test the effect of different dosages of pioglitazone (PIO) on the glomerular expression of podocalyxin and urinary sediment podocalyxin excretion and to explore the potential renoprotective mechanism. Materials and methods: Type 1 diabetes induced with streptozotocin (65 mg/kg) in 36 male Sprague-Dawley rats were randomly allocated to be treated with vehicle or 10, 20, 30 mg/kg/d PIO respectively for 8 weeks. Eight rats were enrolled in the normal control group. Results: At 8th week, rats were sacrificed for the observation of kidney injury through electron microscope. Glomerular podocalyxin production including mRNA and protein were determined by RT-PCR and immunohistochemistry respectively. Levels of urinary albumin excretion and urinary sediment podocalyxin, kidney injury index were all significantly increased, whereas expression of glomerular podocalyxin protein and mRNA were decreased significantly in diabetic rats compared to normal control. Dosages-dependent analysis revealed that protective effect of PIO ameliorated the physiopathological changes and reached a peak at dosage of 20 mg/kg/d. Conclusion: PIO could alleviate diabetic kidney injury in a dose-dependent pattern and the role may be associated with restraining urinary sediment podocalyxin excretion and preserving the glomerular podocalyxin expression. .

Objetivo: Buscamos testar os efeitos de diferentes doses de pioglitazona (PIO) sobre a expressão glomerular de podocalixina e sobre a excreção de podocalixina em células do sedimento urinário, além de explorar o potencial mecanismo de proteção renal. Materiais e métodos: O diabetes tipo 1 foi induzido em 36 ratos Sprague-Dawley machos com estreptozotocina (65 mg/kg). Os animais foram tratados apenas com o veículo, ou com 10, 20, 30 mg/kg/d de PIO por 8 semanas. Oito ratos foram colocados no grupo controle. Resultados: Na oitava semana, os ratos foram sacrificados para se observar a lesão renal em microscopia eletrônica. A produção de podocalixina glomerular, incluindo mRNA e proteína, foi determinada por RT-PCR e imuno-histoquímica, respectivamente. Os níveis urinários de albumina e podocalixina nas células do sedimento urinário e o índice de lesão renal estavam todos significativamente aumentados, enquanto a expressão glomerular da proteína podocalixina e do mRNA estava significativamente diminuída em ratos diabéticos comparados com o controle normal. A análise dos efeitos dose-dependentes revelou que o efeito protetor da PIO melhorou as mudanças fisiopatológicas e atingiu um pico na dose de 20 mg/kg/dia. Conclusão: A PIO pode melhorar a injúria renal de forma dose-dependente e este papel pode estar associado com a prevenção da excreção de podocalixina nas células do sedimento urinário e com a preservação da expressão glomerular de podocalixina. .

Analysis of ultrastructural glomerular basement membrane lesions and podocytes associated with proteinuria and sclerosis in Osborne-Mendel rats with progressive glomerulonephropathy

The renal glomeruli of 12 male Osborne-Mendel (OM) rats 3 to 24 weeks old were examined by electron microscopy. Effacement of podocyte foot processes (FPs) developed at 3 weeks of age and became progressively worse over time. Loss or dislocation of the slit membrane was also found. Vacuoles and osmiophilic lysosomes appeared in the podocytes starting at 6 weeks of age. Podocyte detachment from the glomerular basement membrane (GBM) was apparent at 18 weeks of age. Laminated GBM was occasionally observed in all animals. These features might lead to the development of spontaneous proteinuria and glomerulosclerosis in OM rats.

Fisiopatología da síndrome nefrótica em crianças e adolescentes / Pathophysiology of nephrotic syndrome in children and adolescents

A Síndrome nefrótica (SN), caracterizada por proteinúria, hipoalbuminemia e edema, é a glomerulopatia mais comum em crianças. Apesar dos avanços, sua fisiopatologia permanece desconhecina. Considera-se que a SN é um distúrbio complexo e multifatorial, envolvendo agentes desencadeadores, alteraçôes genéticas e do sistema imune. Alteraçôes genéticas podem aumentar a susceptibilidade à SN ou provocar distúrbios de permeabilidade que se manifestam logo após o nascimento. Várias evidências sugerem também um papel significativo do sistema imne na fisiopatologia dessa doença, com uma aparente resposta anormal dos linfócitos T, Participaçâo de citocinas e quimiocinas, com destaque para o TGFß. Outros echaos sugerem a existência de algum fator circulante de permeabilidade, provavelmente derivado do sistema imune, relacionado às recidivas pós-transplante. O estudo mais aprofundado da fisiopatología da SN poderia proporiconar o desemvolvimiento de fármacos com maior respecificidade e menos efectos adversos

Update in pathophysiology and histopathology of focal segmental glomerulosclerosis.

Focal segmental glomerulosclerosis (FSGS) is the leading cause of nephrotic syndrome in an adult worldwide. The prevalence of FSGS is estimated as being 20-30% in adults over the age of 15 years and slightly higher (30-35%) in the elderly (age > 60 years). The diagnosis solely relies on pathologic findings, which sclerosis involves some, but not all glomeruli (focal), and sclerosis affects a portion, but not the entire, glomerular tuft (segmental). The pathogenesis remains inconclusive but podocyte injury has been postulated. Even though steroid is the mainstay treatment, only 20-40% of patients are complete respond.

The number of podocyte and slit diaphragm is decreased in experimental diabetic nephropathy

OBJETIVO: Determinar o número de podocitos e fendas diafragmáticas, a extensão das fendas diafragmáticas e a espessura da Membrana Basal Glomerular (MBG) na nefropatia diabética. MÉTODOS: Sessenta "Rattus Wistar" de ambos os sexos, pesando entre 200-300g, foi dividido em dois grupos experimentais: grupo normal 10 animais, e grupo diabético induzido por aloxana – 50 animais. A Aloxana foi administrada em dose única endovenosa de 42mg/kg de peso. Medimos o peso, ingestão de água e comida, diurese e glucose sérica e urinária em ambos os grupos antes da injeção de aloxana e 2 (duas) semanas, seis e dose meses após a injeção. A proteinúria foi mensurada aos dose meses em ambos os grupos, no momento do sacrifício, onde removemos o rim direito para estudo ultraestrutural. RESULTADOS: Observamos sinais clínicos e laboratoriais de diabetes severo, nos animais diabéticos aloxânicos em todos os períodos de seguimento. Foi determinado o espessamento da membrana basal glomerular (MBG), número de podocitos, número de fendas diafragmáticas e sua extensão. A membrana basal glomerular do rato diabético mostrou espessamento significativo (mediana=0.29µm; amplitude semi-interquartilica = 0,065µm) em relação ao animal normal (0,23µm; 0,035µm). O número de podocitos do animal diabético (8; 1), número de fenda diafragmática (4; 1), e extensão das fendas diafragmáticas (0,021µm; 0,00435µm) foi significativamente menor em relação aos animais normais (11; 1) e (7; 1.5), e (0,031µm; 0,0058µm). A taxa da proteinúria (0,060mg/24h; 0,037mg/24h) foi maior que nos animais normais (0,00185mg/24h; 0,00055mg/24h). CONCLUSÃO: O diabetes experimental está associado com significativas alterações (p< 0,05) no número de processos podálicos e fendas diafragmáticas e extensão das fendas diafragmáticas e espessamento da membrana basal glomerular (MBG).